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本试剂盒采用独特的缓冲体系，包含了快速制备基因组DNA和PCR扩增的所有试剂，适用于从各种动植物组织、细菌中一步提取基因组DNA并用于PCR扩增。整个提取过程无需液氮研磨，无需有机溶剂抽提，无需无水乙醇沉淀，提取的DNA质量稳定。

本试剂盒提供的2×PCR MasterMix是一种兼容性强的PCR试剂，能够高效特异扩增DNA样品，该试剂包括DNA聚合酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液、PCR反应增强剂等。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点，特别适合于高通量的筛选。

• 向Proteinase K中加入625μL的Proteinase K Storage Buffer使其溶解，-20℃保存。配制好的Proteinase K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
  
• 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
  
• 使用前请检查Buffer SA是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀出现，请将Buffer SA于56℃水浴重新溶解。
  
• 本制品提供的2×PCR MasterMix，使用时需加入模板和引物，并加入RNase-Free Water补足体积，使其浓度为1×即可进行反应。

• 取材：
  植物材料：取约10mg样本于离心管（自备）中；
  动物材料：取约10mg样本于离心管（自备）中；
  细菌：取生长状态良好的菌液200～800μL于离心管（自备）中，收集菌体。
  
• 加入200μL Buffer SA，涡旋混匀。
  
  • 如果是植物叶片和动物组织，应尽量用研磨杵研磨：如果是植物种子，应事先破碎并研细；细菌、1～3mm鼠尾样本可直接涡旋裂解。
• 加入10μL Proteinase K，混匀，56℃孵育10分钟，95℃处理5分钟。
  
  • 如果为动物组织样本，可适当延长56℃孵育时间至30分钟；如有未完全消化的任何组织，应在下一步离心后尽量彻底去除。
    
  • 95℃处理时注意不要超过5分钟。
• 13000rpm（~17900×g），离心5分钟。
  
• 转移上清至新的离心管（自备）中，直接用于PCR扩增，或4℃或-20℃保存溶液。
  
• PCR扩增：
  
  • PCR反应体系：
    以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
    

    成分	用量	终浓度
    2×PCR MasterMix	10μL	1×
    Forward Primer,10μM	1μL	0.4μM
    Reverse Primer,10μM	1μL	0.4μM
    Template DNA	1～2μL	-
    RNase-free Water	至20μL	-

    • 引物浓度请以终浓度0.2～0.6μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
  • PCR反应条件：
    

    步骤	温度	时间	循环数
    预变性	94℃	2min	1
    变性	94℃	30s	30～40
    退火	55～65℃	30s
    延伸	72℃	60s
    终延伸	72℃	5min	1

    
    
    • 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为30～60秒，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
      
    • 延伸时间根据所扩增的片段大小设定，本制品中所包含的Taq DNA Polymerase的扩增效率为1kb/30s。
      
    • 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。循环次数太少，扩增量不足；循环次数多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。
  • 结果检测：反应结束后取5μL反应产物，直接进行琼脂糖凝胶电泳检测。